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豬原代外周血和臍帶血DC原代細胞

細胞培養(yǎng)操作：

收貨處理取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)

傳代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)

傳代代數(shù)可傳5代左右；3代以內狀態(tài)

傳代比例傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法：

1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4.待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。

商品屬性：

形態(tài)：
培養(yǎng)基：豬外周血和臍帶血DC細胞專用培養(yǎng)基

培養(yǎng)環(huán)境：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代特征：可傳5代左右；3代以內狀態(tài)

細胞基本屬性：

種屬來源：豬

組織來源：外周血和臍帶血外周血和臍帶血

生長特性：半懸浮生長

產品規(guī)格：5×105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：

產品貨期：現(xiàn)貨，1周左右

運輸方式：T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應限制：僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用

背景介紹：:樹突狀細胞（Dendritic cells, DC）是機體功能的專職抗原遞呈細胞，它能高效地攝取、加工處理和遞呈抗原，未成熟DC具有較強的遷移能力，成熟DC能有效激活初始型T細胞，處于啟動、調控、并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié)。 DC的來源有兩條途徑：①髓樣干細胞在GM-CSF的刺激下分化為DC，稱為髓樣DC，也稱DCl，與單核細胞和粒細胞有共同的前體細胞；包括朗格漢斯細胞，間皮（或真皮）DCs以及單核細胞衍生的DCs等，②來源于淋巴樣干細胞，稱為淋巴樣DC或漿細胞樣DC，即DC2，與T細胞和和臍帶血DC細胞有共同的前體細胞。樹突狀細胞(DC)表面具有豐富的抗原遞呈分子、共刺激因子和粘附因子，是功能強大的專職抗原遞呈細胞(APC)。DC自身具有免疫刺激能力，是目前發(fā)現(xiàn)的惟一能激活未致敏的初始型T細胞的APC

原代細胞培養(yǎng)的主要步驟包括：

?一、剝離組織，去除外膜、結締組織等?：將組織從動物體中取出，并去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。

二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?：使用生理鹽水或其他適當?shù)木彌_液洗滌組織，然后將其剪成約1mm大小的小塊。

三、?用0.1%～0.2%的消化?：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩沖液中，進行消化。消化時間可根據(jù)具體實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

?四、吹打分散后，過濾、計數(shù)?：將消化后的細胞吹打到一個離心管中，然后過濾、計數(shù)。

五、?按30萬/毫升分瓶培養(yǎng)?：將計數(shù)后的細胞按30萬/毫升的濃度分瓶培養(yǎng)。

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