細(xì)胞名稱 肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移系；PGBE1
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: PGBE1由朱偉勇和鄭杰于1995年建系。源自人肺巨細(xì)胞癌系分離了多個單細(xì)胞，經(jīng)體外侵襲實驗和裸鼠體內(nèi)接種相結(jié)合進行了初步鑒定后，挑選其中３個化細(xì)胞亞系之一。該細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的成瘤率均為１００，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為９４％。
培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況: C7
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
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產(chǎn)品名稱 | 肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移系；PGBE1 |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X64030 |
產(chǎn)品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。
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信號素4A檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBSSEMA4A
去唾液糖蛋白受體檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSasialoglycoprotein receptor
3-甲氧基腎上腺素檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS3-metanephrine
核糖核IgG抗體檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSAnti-RNA IgG
磷化雷帕霉素靶蛋白檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSp-mammalian target of rapamyein
死骨片1檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSSQSTM1
自噬基因Beclin 1檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSBeclin 1
自噬相關(guān)蛋白5檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSAPG5
微管相關(guān)蛋白1A;1B輕鏈3B檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSMicrotubule-associated proteins 1A;1B light chain 3B
低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSlow-density lipoprotein-receptor-related protein 1
磷化乙酰輔酶A檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSPhosphorylation Acetyl coenzyme A
鞘磷脂合成酶1檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSSphingomyelinsynthase 1
血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子6檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSPlatelet;Endothelial Cell Adhesion Molecule 6
中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)絡(luò)檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSneutrophil extracellular traps
3羥基3甲基戊二酰合酶1檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSHMG-CoA synthase 1
丙檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSpropanoic acid
連蛋白抗體檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSzonulin antibody
肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移系；PGBE1原花青素4852-22-6英文名：Proanthocyanidins
英文別名：Oligomeric Proantho Cyanidins（OPC）
CAS登錄號：4852-22-6
分子式：C30H26O12
分子量：578.53
分子結(jié)構(gòu)：
外觀：紅棕色粉末
規(guī)格：20mg/支
純度：≥ 98%
用途：用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。
提取來源：葡萄籽提取物或法國海岸松樹皮提取物。
溶解性：溶于水和大多有機溶劑。
藥理藥效：原花青素（葡萄籽提取物）是一種新型高效抗氧化劑，是目前為止所發(fā)現(xiàn)的強效的自由基清除劑，具有非常強的體內(nèi)活性。用于改善血液循環(huán)、治療糖尿病性視網(wǎng)膜病、減輕水腫和抑制靜脈曲張等，防止糖尿病患者白內(nèi)障手術(shù)后的并發(fā)癥，消除水腫， 滋潤皮膚。花青素和維生素C的組合可以使分解，作為心臟保護劑等。
貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光
有效期： 2年
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